Протокол работы семинара "Хирургия, онкология, иммунология, гематология" от 28.02.98.

Председатель: Виктор Алексеевич Тарасов д.м.н., профессор, заведующий кафедрой торакальной хирургии Медицинской академии последипломного образования, главный хирург городской больницы № 26 (Санкт-Петербург).

Секретарь: Бояркин Г.М (Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова, субординатор).

 Доклад :

Новый подход к химиотерапии солидных опухолей.

К.б.н. М.В.Филатов

Петербургский институт ядерной физики, лаборатория биологии клетки.

В терапии злокачественных новообразований широко используются препараты мажорно подавляющие синтез ДНК (репликацию). Одним из подобных средств является цитозар (AraC, арабинозид цитозина). Однако, минорный синтез ДНК (репарация) большинством ингибиторов не подавляется, что затрудняет воздействие на неделящиеся клетки. Комбинация блокаторов действующих на различные этапы синтеза ДНК позволяет контролировать не только репликацию, но и репарацию. Исследована комбинация AraC и гидроксимочевины (HU), которая в свою очередь угнетает активность рибонуклеотидредуктазы, препятствуя синтезу предшественников ДНК. AraC и HU порознь способны действовать только на делящиеся клетки. Их сочетание блокирует репарацию, что открывает возможность воздействовать на любые клетки. Отсутствие репарации ведёт к образованию сначала однонитевого дефекта, а затем с определённой долей вероятности разрыва второй нити ДНК в этом же месте. Данное событие делает невозможным дальнейшее деление, клетка “репродуктивно погибает”. Индукторами образования дефектов являются радиация, ультрафиолетовое облучение, канцерогены. В клетках также существует спонтанная нестабильность генома её уровень зависит от вида ткани, возраста больного. Накопление спонтанных дефектов в ДНК в нормальных и трансформированных клетках одинаково, однако, их выживаемость в модельных исследованиях различна. Экспозиция клеточных культур комбинации AraC и HU в течении 48 часов инактивирует трансформированные клетки (клетки Хиля), выживаемость составила 0,1%. При этом фибробласты остаются практически полностью жизнеспособными. Хотя эффективность данной комбинации очевидна, неизвестно все ли нормальные клетки организма останутся жизнеспособными в то время как опухолевые будут повреждены. Встаёт вопрос о риске поражения костного мозга. Клетки после экспозиции в течение 5 часов данной комбинации и инкубации выживают все. Если отследить с помощью проточной цитофлуорометрии их дальнейшее развитие, то некоторые из них остановятсят в определённой фазе клеточного цикла. Таким образом, несмотря на то, что клетки не погибли их репродукция задерживается.

Обсуждение:

В.А. Тарасов:

- Существуют ли различия между индукторами повреждений ДНК?

М.В.Филатов:

- В зависимости от повреждающего фактора в репарации участвуют различные системы. Ультрафиолетовое облучение, бензпирен образуют крупные повреждения требующие удаления около 25 нуклеотидов, что эффективно подавляет рост клеток. Радиация вызывает однонитевые разрывы, модификацию оснований требующие замены 2 - 3 нуклеотидов, её эффект соответственно ниже.

Ф.С. Носков д.м.н., профессор (Институт им. Пастера (Санкт-Петербург)):

- Почему различаются индуцированные и спонтанные повреждения генома?

М.В.Филатов:

- Спонтанное повреждение невелико, что требует накопления, так как дефект существует недолго и разрыв второй цепи не успевает развиться. Если повреждения накапливаются, то рано или поздно происходит двухцепочечный разрыв. Клетка имеет программу самоуничтожения активирующуюся, в том числе, при разрыве двух цепочек ДНК. В результате через каскад реакций активируется р-53 останавливающий клетку в цикле или вызывающий апоптоз. Химиотерапия имеет целью индукцию апоптоза, а не собственный эффект повреждающего фактора. Возможно, одним из механизмов является накопление такого числа “дырок”, которое запустит р-53.

Ф.С. Носков:

М.В.Филатов:

- Оказалось, что HU незаменима. Возможна замена AraC на другой аналог нуклеотида, например AraA. В качестве второго препарата может быть использован аридикалин блокирующий ДНК полимеразу. Таким образом, для эффекта угнетения репарации необходим синергизм средств по-разному влияющих на один и тот же процесс.

И.П. Шестаков врач ( ЗАО “Даная” (Санкт-Петербург)) :

М.В.Филатов:

- Идеология нашего подхода в том, что для воздействия безразлично делится клетка или нет. У клеток, как правило, нет чисто G0 фазы, клетки не делятся, когда чего-либо не хватает. Если клетки Хиля подвергнуть голоданию, то они перестанут делиться, но останутся чувствительны к данной комбинации.

А.В. Колосков к.м.н. ( городская больница №26 (Санкт-Петербург)):

М.В.Филатов:

[an error occurred while processing this directive]